Amunine

CRF pada mulanya diasingkan dan disucikan daripada hipotalamus biri-biri oleh Vale dan saintis lain pada tahun 1981. Urutan asid aminonya ialah:
H-Ser-Gln-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr{{ 11}}Phe-Nya-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met{{21 }}Thr-Lys-Ala-Asp-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala- Beliau-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-Leu-Asp-Ile-Ala-NH2
Jujukan ini mengandungi 41 asid amino dengan berat molekul kira-kira 4.7 kDa, dengan serin (Ser) pada terminal N-dan pengubahsuaian alanine (Ala) di terminal-C. Homologi asid amino antara CRF biri-biri dan CRF manusia ialah 95%, dengan hanya perbezaan pada kedudukan 7, 10, 13, 16, 21, 23, 26, 28, 31, 34, dan 38, tetapi fungsinya sangat terpelihara.

CRF (Ovine) Trifluoroacetate (nombor CAS: 79804-71-0) ialah sebatian garam yang terbentuk dengan menggabungkan hujung karboksil CRF dengan asid trifluoroacetic (TFA). Kelebihan pengubahsuaian TFA termasuk:

Keterlarutan dipertingkat: Kumpulan berasid kuat (- COCF ∝) TFA boleh meningkatkan keterlarutan peptida dalam pelarut organik, memudahkan operasi percubaan.
Struktur peptida yang stabil: TFA mengurangkan pengagregatan dan degradasi peptida dengan membentuk jambatan garam, memanjangkan separuh-hayat.
Mengekalkan aktiviti biologi: CRF yang diubah suai masih boleh mengikat dengan cekap pada reseptor CRF (CRFR), mengekalkan ciri fungsi molekul semula jadi.

CRF (Ovine) Trifluoroacetate biasanya disediakan oleh sintesis peptida fasa -pejal (SPPS), di mana rantai sisi asid amino dilindungi oleh kumpulan pelindung Fmoc atau Boc, secara beransur-ansur digabungkan untuk membentuk rantai polipeptida linear, dan akhirnya dipotong oleh resin TFA dan ditulenkan. Piawaian kawalan kualiti termasuk:

Ketulenan: Kromatografi cecair berprestasi tinggi (HPLC) mengesan ketulenan Lebih daripada atau sama dengan 98%.
Pengesahan berat molekul: Spektrometri jisim (MS) mengesahkan bahawa berat molekul adalah konsisten dengan nilai teori.
Ujian aktiviti biologi: Sahkan keupayaannya untuk merangsang rembesan hormon adrenokortikotropik (ACTH) melalui eksperimen sel in vitro (seperti sel tumor pituitari AtT-20).

Reseptor CRF tergolong dalam keluarga B-kelas G protein coupled receptor (GPCR) keluarga, yang merangkumi dua subjenis: CRF ₁ R dan CRF ₂ R
CRF ₁ R: Diedarkan secara meluas dalam sistem saraf pusat (seperti korteks serebrum, hippocampus, amygdala) dan tisu periferi (seperti kelenjar pituitari, kelenjar adrenal, plasenta).
CRF ₂ R: terutamanya dinyatakan dalam nukleus paraventrikular hipotalamus, lokus coeruleus, saraf tunjang, dan tisu periferi seperti jantung, saluran darah dan saluran gastrousus.
Homologi jujukan asid amino antara kedua-dua reseptor mencapai 70%, tetapi terdapat perbezaan dalam kekhususan pengikatan ligan: CRF ₁ R mempunyai pertalian yang lebih tinggi untuk CRF berbanding CRF ₂ R, yang cenderung untuk mengikat ligan keluarga Urocortin (UCN).

Selepas mengikat kepada reseptor, CRF menggalakkan aktiviti adenylate cyclase (AC) dengan mengaktifkan protein G s, membawa kepada peningkatan tahap adenosin monofosfat (cAMP) intraselular, yang seterusnya mengaktifkan protein kinase A (PKA) dan molekul isyarat hiliran seperti CREB. Selain itu, CRF boleh mengaktifkan fosfolipase C (PLC) melalui protein G q, mencetuskan mobilisasi ion kalsium (Ca ² ⁺) dan pengaktifan protein kinase C (PKC).
Nod isyarat utama ialah
Laluan CAMP PKA: mengawal rembesan ACTH, metabolisme glukosa dan ekspresi gen.
Ca ² ⁺ - Laluan PKC: terlibat dalam pengawalan keceriaan neuron dan keplastikan sinaptik.
Laluan MAPK: mengantara-tindak balas penyesuaian jangka panjang (seperti survival neuron) melalui fosforilasi ERK1/2.

Pendedahan jangka panjang kepada CRF boleh menyebabkan penyahpekaan reseptor, ditunjukkan sebagai penurunan kecekapan gandingan protein G dan fosforilasi reseptor. Penyahpekaan CRF ₁ R terutamanya bergantung pada - penangkapan dalam endositosis pengantara, manakala kecekapan endositosis CRF ₂ R adalah agak rendah, yang mungkin berkaitan dengan perbezaan penyetempatan subselular reseptor. Selepas endositosis, reseptor boleh dikitar semula ke membran sel atau memasuki lisosom untuk degradasi, yang penting untuk mengekalkan homeostasis berfungsi reseptor.